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凍干熒光PCR試劑凍干方法是將熒光PCR試劑經(jīng)過預(yù)凍，在真空狀態(tài)下進行升華，后可制備成凍干粉。凍干熒光PCR試劑時，選用的反應(yīng)管在做凍干時有許多不足之處：1.由于反應(yīng)管呈上寬下窄的錐字形，還需要借助其他工具支撐，這樣反應(yīng)管試劑與凍干機擱板的接觸面積很小，升華時傳熱會受到限制，延長了預(yù)凍和升華的時間，反應(yīng)管中的凍干程序一般在24～30小時，凍干制品日產(chǎn)量很低。2.反應(yīng)管中的凍干，在加入凍干混合試劑后，需要進行離心處理，排出氣泡，并將粘附在反應(yīng)管壁上的試劑離心下來。3.反應(yīng)管中的...
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熒光定量PCR的效率值可通過標準曲線獲取。理想的反應(yīng)效率為100%。效率較高（高于110%）一般說明反應(yīng)過程中存在抑制作用。引起抑制作用的原因主要是RAN或者DNA質(zhì)量較差，模板濃度過高及含有核酸鈍化的殘余物。反應(yīng)效率較低（低于90%）的原因有試劑濃度不適（主要是引物、鎂、Taq、DNA、聚合酶、尤其是在多重試驗中）。造成效率低的其他因素有引物Tm之間的差異超過5℃或者是熱循環(huán)條件不適。抑制作用和較低的效率會影響分析的靈敏度，導(dǎo)致動態(tài)范圍減小及通用性降低。怎樣解決呢？可在做凍...
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熒光PCR凍干芯片的制備方法簡單快速，易于操作，縮短凍干所需時間，一般可在八小時內(nèi)完成凍干步驟。熒光PCR凍干芯片的制備方法示例,1.先要稱取制備凍干保護劑如海藻糖、棉子糖、右旋糖酐、甘油、焦磷酸二乙酯處理過的水，置于容器中混合均勻，然后加熱至*溶解，在放入2～8℃冷卻。2.預(yù)混熒光定量PCR試劑如將PCR反應(yīng)緩沖液、引物、探針、dNTPs和DNA聚合酶混合均勻；將預(yù)混的熒光定量PCR試劑和凍干保護劑混合均勻（體積比為3:1），制備成凍干試劑；取5～8μL的凍干試劑點在微流控...
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凍干對熒光探針和熒光染料有防護作用，凍干可防止探針和染料降解，提高反應(yīng)的靈敏度和特異性。接著介紹一下熒光探針和熒光染料的特性。熒光探針是PCR擴增時在加入一對引物的同時加入熒光探針，探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。熒光染料是在PCR反應(yīng)體系中，加入...
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單效外循環(huán)濃縮器對溶液進行蒸發(fā)濃縮時，在中藥提取、生物醫(yī)藥產(chǎn)品的提取過程中應(yīng)用尤其之多。單效濃縮器應(yīng)用于化工、醫(yī)藥、廢水處理行業(yè)中，批量小，品種多的真空濃縮過程中。單效外循環(huán)濃縮器原理是利用外加熱自然循環(huán)與真空負壓蒸發(fā)結(jié)合的方式，將溶液進行蒸發(fā)濃縮，將溶劑和溶液進行分離。生蒸汽進入加熱室，將料液加熱上升，從噴管噴入蒸發(fā)室，進行氣液分離，其料液從循環(huán)管回到加熱室下部再進行加熱，料液受熱后又噴入蒸發(fā)室開成循環(huán)。當(dāng)進入的料液濃縮到一定程度，自控儀表檢測反饋后，由出料口出料，蒸發(fā)室蒸...
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制品在凍干過程中的升華干燥，分為一次干燥和二次干燥。一次干燥的要點，當(dāng)凍干箱內(nèi)的壓力降到60Pa（根據(jù)制品特點而定）以下，就可以給制品加熱，為制品升華提供能量，制品升華的速度由加熱能力和冷阱的捕水能力而定。但凍干箱的壓力必須維持在允許的高壓力以下，板層的溫度在一次升華不要超過共溶點?？梢酝ㄟ^以下現(xiàn)象斷定一階段干燥結(jié)束：1.干燥層和凍結(jié)層的交界面到達瓶底并消失。2.產(chǎn)品溫度上升到接近板層的溫度。3.凍干箱的壓力且維持不變。上述現(xiàn)象發(fā)生后，至少再延長0.5~1小時，以*除制品中的...
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制藥凍干機要具備安全性、可靠性、適用性。在選擇制藥凍干機時要滿足以下幾點性能要求。1.凍干機箱體內(nèi)部要采用大圓角設(shè)計，表面采用鏡面拋光，箱體底部采用傾角設(shè)計，要符合FDA及GMP要求。2.冷阱要采用外置盤管，冷阱內(nèi)要光亮*，避免二次污染及交叉污染。3.要采用立式冷阱快速的熱水浸泡除霜，縮短間歇時間。4.干燥箱與冷阱要采用分體式結(jié)構(gòu)，實現(xiàn)無菌隔離。5.系統(tǒng)密封性要好，極限真空度要≤1Pa。6.系統(tǒng)要有低溫進箱、二次回凍（反復(fù)預(yù)凍）、自動進氣和壓塞、低溫出箱的功能。7.要有回填控...
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原位凍干機是介于小型實驗室凍干機和中試凍干機之間的一款機型。原位凍干機為立式，可原位預(yù)凍，減少凍干制品的污染，凍干速度快，捕水量大，0.2平米的原位凍干機凍干時間一般為15-18個小時。板層可獨立控溫，凍干制品的均一度較好，有全自動程序，可設(shè)置完整的凍干曲線，通過凍干曲線可隨時查詢溫度及真空度曲線。方便工藝優(yōu)化及凍干驗證。選擇原位凍干機比較適合預(yù)算成本相對較低且性能又要高于小型實驗室凍干機的用戶。原位凍干機應(yīng)用于食品、生物研究、化工、制藥、醫(yī)學(xué)等行業(yè)。博醫(yī)康原位凍干機Pilo...
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